### 感染预实验概述

本实验旨在使用24孔培养板对目的细胞和工具细胞进行感染预实验。工具细胞可以选择293T（人胚肾上皮细胞）、H1299（人肺癌细胞）或其他适宜细胞。实验所需材料包括培养基、24孔培养板、移液枪、枪头、EP管、细胞计数板、冰盒以及废液缸等。在某些情况下，根据目的细胞的需求可以适量添加Polybrene。

### 第一天：准备细胞

首先，培养细胞直至对数生长期。利用胰酶对细胞进行消化后，进行细胞计数并测定细胞密度。为每孔接种5×10⁴个细胞，并添加500µL的细胞培养液。一般情况下，H1299或293T细胞在感染后约3天可以达到80%-90%的融合度。在接种目的细胞时，请根据其实际生长速度调整接种量，从而确保目的细胞在感染后第3天也能达到相应的融合度。

### 第二天：感染操作

在实验的第二天，需进行以下步骤：

(1) **准备慢病毒颗粒**：计算所需的慢病毒颗粒量，并从-80℃的冰箱中取出，进行冰浴解冻。

(2) **感染目的细胞**：将培养的细胞从培养箱中取出，在显微镜下观察其生长状况和细胞融合度。如细胞状态良好，即可开始实验流程：

A. 使用移液枪小心吸去24孔板中的旧培养液，加入新鲜的完全培养液；

B. 将计算好的慢病毒颗粒液添加到细胞中，轻轻在工作台上以划8字的方式进行混匀；

C. 混匀后，将细胞培养板置于37℃、5% CO₂培养箱中，进行过夜培养。

### 第三天：更换培养液

感染12-16小时后，吸出含慢病毒颗粒的培养液，重新向培养板添加含5%灭活FBS（胎牛血清）的培养液，并继续培养。需注意，目的细胞的感染时间可能需要调整，部分细胞不宜感染超过12小时。

### 第四天：继续培养与观察

继续观察细胞的生长情况，检查是否出现异常情况，为后续实验作准备。

### 第五天：评估感染效率

在实验的最后一天，观察慢病毒颗粒的感染效率。将24孔培养板密封，使用70%乙醇清洁培养板外表，然后在倒置荧光显微镜下观察荧光。根据观察情况拍照记录，并初步估算慢病毒颗粒对细胞的感染效率。如果慢病毒颗粒携带的基因表达所需时间较长，建议在感染72或96小时后再观察荧光表达。

依据荧光表现，可以通过MOI梯度测试找出目的细胞的MOI值，为后续研究提供指导。为了获得最佳实验结果，选择**尊龙凯时**的高质量实验材料和设备，将为您的研究保驾护航，确保细胞感染实验的成功。