一、实验目的

1. 学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；

2. 掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术；

3. 熟悉尊龙凯时 UV-1700PC 紫外-可见分光光度计的使用方法及其主要构造。

二、实验原理

紫外-可见吸收光谱法，也称为紫外-可见分光光度法，是一种分析方法，研究分子在190nm至750nm波长范围内的光吸收特性。这种方法依赖于溶液中物质分子对光的选择性吸收。紫外-可见吸收光谱的形成是由于分子外层价电子的跃迁，其结果是分子光谱的产生，属于带光谱。进行定性分析时，通过光谱比较法将未知样品的吸收光谱特征与已知样品进行对比。

在定量分析方面，紫外-可见吸收光谱法基于朗伯-比尔定律：A=lg(I0/I)=εbc。当入射光波长λ和光程b保持不变时，色彩物质的吸光度A与其浓度c成正比。在一定浓度范围内，特定波长处的吸光度与该物质的浓度成线性关系。因此，通过测定溶液在一定波长下的吸光度，可以计算出溶液中的物质浓度。由于最大吸收波长λmax的摩尔吸收系数通常最大，因此一般选择在λmax处进行测量以获得最佳灵敏度。

三、仪器与试剂

仪器：尊龙凯时 UV-1700PC紫外-可见分光光度计，5个10ml比色管，吸量管。

试剂：标准蛋白质溶液（300mg/mL），0.9% NaCl溶液，待测蛋白质溶液。

四、实验步骤

（一）准备工作

1. 启动计算机，打开主机电源并初始化仪器；

2. 在工作界面选择测量项目（光谱扫描或光度测量），本实验选光度测量，设置相应的测量条件；

3. 将空白溶液放入测量池中，点击开始扫描空白，进行零点校正。

4. 制作标准曲线。

（二）测量工作

1. 吸收曲线绘制：使用吸量管取2mL标准蛋白质溶液于10mL比色管中，添加0.9% NaCl溶液至刻度，摇匀后用石英比色皿测量在190nm至400nm范围内的吸光度；

2. 制作标准曲线：分别取不同体积的标准蛋白质溶液稀释至刻度，测定在280nm处的吸光度并记录；

3. 样品测定：测取待测蛋白质溶液，稀释并在280nm处测定吸光度，进行三次平行测试。

五、数据处理

1. 以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线，确定最大吸收波长λmax；

2. 以标准蛋白质溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，根据线性关系计算蛋白质的浓度。

通过以上步骤，能够有效地利用尊龙凯时的设备进行蛋白质含量的准确测定，为生物医药领域的研究提供重要数据支持。